في الكيمياء، يُعرّف التخفيف بأنه عملية تقليل تركيز السائل، بينما التخفيف التسلسلي هو عملية التخفيف المتكرر للمحلول من أجل تضخيم عامل التخفيف بسرعة. عادةً ما يتم إجراء التخفيفات التسلسلية في تجارب تتطلب حلولاً مخففة للغاية، كما هو الحال في التجارب التي تتضمن منحنيات التركيز على مقياس لوغاريتمي أو عند تحديد كثافة البكتيريا. تستخدم التخفيفات التسلسلية على نطاق واسع في العلوم التطبيقية مثل الكيمياء الحيوية وعلم الأحياء الدقيقة وعلم العقاقير والفيزياء.
خطوات
إجراء التخفيف الأساسي
1 حدد المخفف المناسب. يعد اختيار السائل الذي ستستخدمه لتخفيف المادة خطوة مهمة. من الممكن تخفيف العديد من المحاليل بالماء المقطر، لكن هذا ليس هو الحال دائمًا. إذا كنت ترغب في تخفيف بكتيريا أو نوع آخر من الخلايا، فمن المحتمل أن تحتاج إلى تخفيف الخلايا في بيئة مناسبة لنمو البكتيريا أو نموها. X مصدر البحث يجب استخدام السائل الذي اخترته لكل تخفيف متسلسل.
- إذا لم تكن متأكدًا من النوع الذي يجب استخدامه، فاطلب المساعدة أو تحقق عبر الإنترنت لمعرفة ما إذا كان الآخرون قد فعلوا تخفيفات مماثلة.
2 قم بإعداد عدة أنابيب اختبار، كل منها يحتوي على 9 مل من التخفيف. ستعمل هذه الأنابيب كبيئة مناسبة لعملية التخفيف. X مصدر البحث ستقوم بإضافة محلول العينة غير المخفف إلى الأنبوب الأول ثم تخفيفه بشكل متسلسل في الأنابيب التالية.
- سيساعدك وضع ملصقات على جميع الأنابيب قبل أن تبدأ حتى لا تشعر بالارتباك بمجرد بدء عملية التخفيف.
- سيكون تخفيف كل أنبوب أكبر 10 مرات من الأنبوب غير المخفف، والتخفيفات التالية X مصدر البحث سيكون تخفيف الأنابيب على النحو التالي الأول 110، والثاني 1 100، والثالث 1 1000، وهكذا. حدد مسبقًا عدد التخفيفات التي تحتاجها حتى لا تهدر الأنابيب أو أرق.
3 قم بإعداد أنبوب اختبار يحتوي على 2 مل على الأقل من المحلول غير المخفف. أقل كمية من المحلول الأصلي غير المخفف الذي ستحتاجه لإجراء التخفيف التسلسلي هو 1 مل. قم بتسمية هذا الأنبوب بعلامة “GM” للمحلول غير المخفف.
- اخلط المحلول بعناية قبل البدء في التخفيف. X موارد البحث
4 قم بإجراء التخفيف الأول. ارسم 1 مل من المحلول غير المخفف من أنبوب الاختبار المسمى “جم” باستخدام سحاحة وانقله إلى أنبوب الاختبار “110” الذي يحتوي على 9 مل من المخفف ويخلط جيدًا. يحتوي هذا الأنبوب الآن على 1 مل من المحلول غير المخفف في 9 مل من المادة المخففة. لذلك نقول إن المحلول الأصلي تم تخفيفه بمعامل 10.
5 قم بإجراء التخفيف الثاني. سنكمل التخفيف التسلسلي عن طريق أخذ 1 مل من الأنبوب “110” وإضافته إلى 9 مل من التخفيف السائل في الأنبوب “1 100”. قم بخلط محتويات الأنبوب 110 بعناية قبل إضافتها إلى الأنبوب التالي. امزج محتويات الأنبوب 1 100 مرة أخرى بعد عملية التخفيف. الآن قمنا بتخفيف المحلول من الأنبوب 110 عشرة أضعاف في الأنبوب المرقّم 1 100.
6 استمر في إجراء التخفيف لسلسلة أطول من التخفيفات. يمكن تكرار هذه العملية عدة مرات حسب الحاجة للحصول أخيرًا على محلول التركيز المطلوب. يمكنك استخدام التخفيف التسلسلي في تجربة تتضمن رسم منحنيات التركيز لعمل سلسلة من المحاليل المخففة بتركيزات 1 و 110 و 1 100 و 1 1000.
احسب معامل التخفيف النهائي والتركيز
1 احسب نسبة التخفيف النهائية في التخفيف المتسلسل. يمكن حساب نسبة التخفيف الإجمالية بضرب عامل التخفيف لكل خطوة من الخطوة الأولى إلى الخطوة الأخيرة. يمكن كتابة هذه العملية رياضيًا على النحو التالي Dt = D1 x D2 x D3 x… x Dn، حيث Dt هو عامل التخفيف الكلي و Dn هي نسبة التخفيف. X موارد البحث
- على سبيل المثال لنفترض أنك تمييع المحلول 110 أربع مرات. أدخل قيمة عامل التخفيف في المعادلة Dt = 10 x 10 x 10 x 10 = 10،000.
- يصبح عامل التخفيف النهائي للأنبوب الرابع في التخفيف التسلسلي 1 10000. تركيز المادة الآن أقل بحوالي 10000 مرة من المحلول الأصلي غير المخفف.
2 تحديد تركيز المحلول بعد التخفيف. لحساب التركيز النهائي للمحلول بعد التخفيف المتسلسل، ستحتاج إلى معرفة التركيز الأولي للمحلول قبل التخفيف. ستستخدم الصيغة Cfinal = Cinitial / D حيث Cfinal هو تركيز المحلول الأخير بعد سلسلة تخفيف المحلول، و Cinitial هو التركيز الأولي للمحلول الأصلي و D هو نسبة التخفيف المحددة مسبقًا. X موارد البحث
- على سبيل المثال إذا بدأت بمحلول خلوي بتركيز 1،000،000 خلية لكل مل ونسبة التخفيف 1،000، فما هو التركيز النهائي للعينة المخففة
- باستخدام المعادلة
- Cfinal = سينمائي / د
النهائي = 1،000،000 / 1،000
- “Cfinal” = 1000 خلية لكل مل.
3 تأكد من تطابق جميع الوحدات. عند إجراء أي عمليات حسابية، سترغب دائمًا في التأكد من أن الوحدات تنتهي بالمطابقة. X مصدر بحث إذا بدأت بخلية لكل وحدة مل، فتأكد من إنهاء الحسابات بخلية لكل وحدة مل من المنتج. أيضًا، إذا كان التركيز الأولي هو جزء في المليون (جزء في المليون)، فيجب أيضًا أن يكون التركيز النهائي جزءًا في المليون.